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    保存專用血清時要多注意以下幾點
    發布時間:2022-04-18 點擊次數:202次
      專用血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學成分組成,這些化學成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉氨酶等。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。
      專用血清來源于非免疫的鼠宿主,經過脂質萃取PBS溶液透析,改善其透明度。推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍,配成5%-20%的工作液,直接滴加在組織切片或者細胞涂片上,37℃度孵育10-30分鐘,清除血清,勿洗,滴加適當比例稀釋的一抗工作液,37℃孵育1-2h或4℃過夜。注意:封閉用血清中不能含有目標蛋白,且與一抗來源不同,可用與二抗相同來源的封閉血清。
      專用血清的保存應該注意以下幾點:
      1、需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中,4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。
      2、熱滅活是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過程中須規則搖晃均勻,此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活。除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物增多,而且還會影響血清的質量。補體參與反應有:細胞毒作用,平滑肌細胞收縮,肥大細胞和血小板釋放組胺,增強吞噬作用,促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化。
      3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀。

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